rhAlbumin, альбумин человека, рекомбинантный белок

rhAlbumin, альбумин человека, рекомбинантный белок
Спецификация rhAlbumin.pdf
Объем: 0 мг
Наличие: Есть в наличии
Цена: 0 р.

Доступные варианты

* Фасовка:
Количество:  

Источник:   Клеточная линия CHO, продуцирующая rhAlbumin.

Чистота:  >98% в соответствии с электрофорезом в ПААГ с последующим окрашиванием Coomassie Brilliant Blue.

Уровень эндотоксина:  <0,1 EU на 1 мкг белка, LAL-тест.

Молекулярный вес:  66 кДа в редуцирующих условиях в ПААГ.

 

Форма

Лиофильно высушен из буферного раствора (PBS), содержащего 0,05% Tween20, pH 7.0, профильтрованного через фильтр с диаметром пор 0,22мкм.
Не содержит вспомогательных белков.

Разведение

Центрифугировать флакон при 1000g, 3 мин. Добавить стерильный фосфатный буферный раствор (PBS) до конечной концентрации 0,1-1 мкг/мкл. Оставить на 20-30 мин при комнатной температуре, затем центрифугировать при 1000g в течение 1 мин, и мягко ресуспендировать. Для приготовления рабочих растворов можно использовать буфер на водной основе или культуральную среду. Добавление вспомогательных белков (BSA или FBS) не является необходимым.

Условия транспортировки

Перевозить при комнатной температуре.

Стабильность и Условия хранения:

  • 12 месяцев, хранение невскрытой упаковки, при температуре от -20 до -70°C.
  • 1 месяц, разведенный в стерильных условиях, при температуре от 2 до 8°C.
  • 6 месяцев, разведенный в стерильных условиях, при температуре от -20 до -70°C.

Не рекомендуются повторные циклы замораживания-оттаивания раствора рекомбинантного белка.

Описание
Дополнительное описание

Человеческий сывороточный альбумин (ЧСА, англ. Human Serum Albumin, HSA) является основным белком плазмы человека и обладает многими физиологическими свойствами благодаря своей уникальной структуре. Сывороточный альбумин человека представляет собой глобулярный белок 66,4 кДа. ЧСА синтезируется исключительно в гепатоцитах в виде отдельной полипептидной цепи,состоящей из 585 аминокислотных остатков, секретируется в плазму без гликозилирования, имеет один остаток триптофана (Trp 214) и свободную цистеинил сульфгидрильную группу. Свободная -SH группа цистеина (34Cys) обеспечивает восстановительный потенциал альбумина и доступна для ацилирования (ЧСА-S-R) и нитрозилирования (ЧСА-S-NO). Период полураспада ЧСА составляет 19 дней. Его вторичная структура организована тремя гомологичными доменами и каждый из доменов состоит из двух субдоменов. Трехмерная структура имеет сердцеобразную форму, и проявляет определенную структурную гибкость в зависимости от незначительных изменений рН в растворе. Основными функциями ЧСА являются: (1) регулирование плазменного онкотического давления, (2) связывание и транспортировка эндогенных физиологических метаболитов (например, билирубин, жирные кислоты) и экзогенных лиганд (например, варфарин , ибупрофен), а также ионов метала и (3) антиоксидантная защита.

В настоящее время признано, что антиоксидантные свойства альбумина определяются его способностью связывать ионы металлов и свободные радикалы. Известно, что альбумин обеспечивает защиту от перекисного окисления липидов (ПОЛ), как in vivo так и in vitro. В модельной системе показано, что антиоксидантный эффект реализуется за счет поглощения свободных радикалов Cys-34, в то время как Met действует главным образом в виде металл-хелатирующего агента направленного на уменьшение последствий реакций окисления. Доставерно известно, что культивирование клеток в промышленном масштабе с использованием биореакторов, подвергает клетки существенным физическим и метаболическим стрессам. Присутствие растворенного кислорода и пузырьков воздуха вместе с компонентами среды, например, ионами переходных металлов, в том числе ионы меди (Cu+1) и железа (Fe+2), может приводить к ПОЛ. Добавление альбумина в культуральную среду приводит к связыванию этих металлов и защищает клетки от каталитических последствий ПОЛ, приводящих к повреждениям клеток.

Показано положительное влияние альбумина на культивирование как первичных, так и стабильных клеточных линий, определяемое его взаимодействием с другими биологическими факторами, такими как инсулин, эпидермальный фактор роста (EGF), или в качестве носителя внутриклеточных сигнальных молекул.

Например, совместно с EGF, альбумин увеличивает пролиферативную активность клеток-предшественников сетчатки глаза. Показана эффективность добавления альбумина в среду при культивирования эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) человека в условиях культивирования без фидерного слоя и сыворотки. Роль альбумина в функционировании биоактивных молекул не является абсолютной, однако была показана эффективность использования альбумина для обеспечения устойчивого клеточного роста и высокой жизнеспособности.

Существует растущий интерес к использованию альбумина в культуральных средах в областях тканевой инженерии и регенеративной медицины, где необходимы безсывороточные условия культивирования или культивирование в отсутствии компонентов животного происхождения. В этой связи, использование рекомбинантного альбумина человека является предпочтительным, так как отвечает как требованиям культивирования, так и нормативным требованиям и требованиям безопасности, что имеет важное значение для будущего клинического применения потенциальных биомедицинских клеточных продуктов.

Использованная литература:

Mujaj S, Manton K, Upton Z, Richards S (2010) Serum-free primary human fibroblast and keratinocyte coculture. Tissue Eng Part A. doi:10.1089/ten.tea.2009.0251

Manton KJ, Richards S, Van Lonkhuyzen D, Leavesley D, Upton Z (2010) A chimeric vitronectin:IGF-I protein sup-ports feeder-cell-free and serum-free culture of human embryonic stem cells. Stem Cells Dev. doi:10.1089/scd. 2009.0504

Ng ES, Davis R, Stanley EG, Elefanty AG (2008) A protocol describing the use of a recombinant protein-based, animal product-free medium (APEL) for human embryonic stem cell differentiation as spin embryoid bodies. Nat Protoc 3:768–776

Hatzistavrou T, Micallef SJ, Ng ES, Vadolas J, Stanley EG, Elefanty AG (2009) ErythRED, a hESC line enabling identification of erythroid cells. Nat Methods 6:659–662

Ishima Y, Akaike T, Kragh-Hansen U, Hiroyama S, Sawa T, Suenaga A, Maruyama T, Kai T, Otagiri M (2008) S-nitrosylated human serum albumin-mediated cytopro-tective activity is enhanced by fatty acid binding. J Biol Chem 283:34966–34975

Bolitho C, Bayl P, Hou JY, Lynch G, Hassel AJ, Wall AJ, Zoellner H (2007) The anti-apoptotic activity of albumin for endothelium is mediated by a partially cryptic protein domain and reduced by inhibitors of G-coupled protein and PI-3 kinase, but is independent of radical scavenging or bound lipid. J Vasc Res 44:313–324

Merten OW (2002) Development of serum-free media for cell growth and production of viruses/viral vaccines—safety issues of animal products used in serum-free media. Dev Biol (Basel) 111:233–257

Garcia-Gonzalo FR, Belmonte JC (2008) Albumin-associated lipids regulate human embryonic stem cell self-renewal. PLoS ONE 3:e1384

Bolitho C, Bayl P, Hou JY, Lynch G, Hassel AJ, Wall AJ, Zoellner H (2007) The anti-apoptotic activity of albumin for endothelium is mediated by a partially cryptic protein domain and reduced by inhibitors of G-coupled protein and PI-3 kinase, but is independent of radical scavenging or bound lipid. J Vasc Res 44:313–324

Carter DC, Ho JX (1994) Structure of serum albumin. Adv Protein Chem 45:153–203

Peters T Jr (1996) All about albumin: biochemistry, genetics, and medical applications. Academic Press, San Diego

Zhang Z, Chisti Y, Moo-Young MJ (1995) Effects of the hydrodynamic environment and shear protectants on sur-vival of erythrocytes in suspension. J Biotechnol 43:33–40

Guedes S, Vitorino R, Domingues R, Amado F, Domingues P (2009) Oxidation of bovine serum albumin: identification of oxidation products and structural modifications. Rapid Commun Mass Spectrom 23:2307–2315

Bourdon E, Loreau N, Lagrost L, Blache D (2005) Differential effects of cysteine and methionine residues in the anti-oxidant activity of human serum albumin. Free Radic Res 39:15–20

Roche M, Rondeau P, Singh NR, Tarnus E, Bourdon E (2008) The antioxidant properties of serum albumin. FEBS Lett 582:1783–1787

He XM, Carter DC (1992) Atomic structure and chemistry of human serum albumin. Nature 358:209–215